Одной из важнейших проблем ПЦР-лаборатории является ее контаминация - загрязнение проб и реактивов целевым фрагментом ДНК. Раннее выявление факта и источника контаминации значительно сокращает потери реактивов и время простоя лаборатории. Однако, лучшим решением является предотвращение контаминации за счет соблюдения правил работы в лаборатории. В основном, меры предосторожности, которые обычно принимаются при обращении с микробиологическими материалы, в равной степени применимы к процедурам, связанным с ПЦР.

Источники контаминации можно разделить на три группы:

  1. Загрязнение ампликонами. Продукт реакции и определяемый участок ДНК фактические являются одним и тем же, поэтому попадание ампликонов в реактивы или анализируемые образцы в процессе работы будет вызывать ложноположительные результаты;
  2. Переносом ДНК между образцами при одновременной пробопродготовке;
  3. Оператор тоже может быть источником контаминации образцов.

Основные правила работы, призванные снизить риск контаминации лаборатории:

  1. Максимально использовать одноразовые вещи;
  2. Все реактивы должны быть аликвотированы;
  3. Те реактивы, которые можно автоклавировать, должны быть автоклавированы;
  4. Использовать и часто менять резиновые перчатки;
  5. Дозирование должно проводиться методом вытеснения;
  6. При приготовлении ПЦР-смеси использовать мастер-миксы, чтобы снизить количество операций;
  7. Персонал, которые выполняет работу с продуктами ПЦР не должен быть задействован в других операциях в других зонах. Если это невозможно, то эти операции должны проводиться в разные дни;
  8. По-возможности, предпочитать методики, которые не требуют открытия пробирки после проведения ПЦР.

Выявление контаминации

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить