Двойной перегибы ПЦР-кривой

Больше
4 года 4 мес. назад #37 от A.S.
При титровании системы на высоких матрицах дважды наблюдается выход на плато. При этом на низких концентрациях такого эффекта нет. Матрица искусственная плазмида, не геномка. Праймерам и зонду отжигаться больше негде, только на плазмиде. Кто-нибудь сталкивался с подобным. И как можно объяснить данное явление?

Пожалуйста Войти или Регистрация, чтобы присоединиться к беседе.

Больше
4 года 4 мес. назад #38 от A.S.
Вложения:

Пожалуйста Войти или Регистрация, чтобы присоединиться к беседе.

  • Vooden
  • Посетитель
  • Посетитель
4 года 4 мес. назад #39 от Vooden
Vooden ответил в теме Двойной перегибы ПЦР-кривой
Это одиночная ПЦР или мультиплекс? Зонд один или несколько?
Как проверяли на места отжига?

Пожалуйста Войти или Регистрация, чтобы присоединиться к беседе.

Больше
4 года 4 мес. назад #40 от A.S.
A.S. ответил в теме Двойной перегибы ПЦР-кривой
Одиночная ПЦР, два праймерам и зонд. Зонд проверяли по бласту. А вообще заменили зонд (новый сдизайнили), и история повторилась.

Пожалуйста Войти или Регистрация, чтобы присоединиться к беседе.

  • Vooden
  • Посетитель
  • Посетитель
4 года 4 мес. назад #41 от Vooden
Vooden ответил в теме Двойной перегибы ПЦР-кривой
Если бы это был мультиплекс, то можно было бы подумать, что зонд садится на другой ампликон.А так получается в системе два продукта, надо проверять неспецифику. Например, форезом или плавлением. Форезом, конечно, лучше.
Надо проверять праймеры на специфичность в том числе и к самой плазмиде. Вторым продуктом может быть длинный участок плазмиды. Он синтезируется медленне и зонд может не так эффективно садиться, поэтому и получается второй горб.

Пожалуйста Войти или Регистрация, чтобы присоединиться к беседе.

Время создания страницы: 0.203 секунд
Работает на Kunena форум