Двойной перегибы ПЦР-кривой

При титровании системы на высоких матрицах дважды наблюдается выход на плато. При этом на низких концентрациях такого эффекта нет. Матрица искусственная плазмида, не геномка. Праймерам и зонду отжигаться больше негде, только на плазмиде. Кто-нибудь сталкивался с подобным. И как можно объяснить данное явление?

Это одиночная ПЦР или мультиплекс? Зонд один или несколько?
Как проверяли на места отжига?

Одиночная ПЦР, два праймерам и зонд. Зонд проверяли по бласту. А вообще заменили зонд (новый сдизайнили), и история повторилась.

Если бы это был мультиплекс, то можно было бы подумать, что зонд садится на другой ампликон.А так получается в системе два продукта, надо проверять неспецифику. Например, форезом или плавлением. Форезом, конечно, лучше.
Надо проверять праймеры на специфичность в том числе и к самой плазмиде. Вторым продуктом может быть длинный участок плазмиды. Он синтезируется медленне и зонд может не так эффективно садиться, поэтому и получается второй горб.