Проверка специфичности ПЦР тест-систем
Использование открытых последовательностей праймеров для разработки собственных тест-систем довольно привлекательно, так как экономит время на разработку и гарантирует какой-то результат. Однако, актуальность и применимость этой информации для решения конкретных задач необходимо проверить. В данной статье рассмотрен пример оценки специфичности литературных тест-систем для детектирования C. trachomatis по гену 16S ДНК. Этот ген довольно консервативен и может быть использован для для выявления всех представителей Chlamydiaceae.
SARS-CoV-2
Вирус SARS-CoV-2 является седьмым из числа известных коронавирусов, которые способны заражать человека (коронавирусы человека). Четыре из этих вирусов - 229E, NL63, HKU1 и OC43 - являются эндемичными сезонными вирусами, которые, как правило, вызывают респираторные заболевания легкого течения. В 2002 г. и 2012 г. появились вирусы SARS-CoV и MERS-CoV, которые способны вызывать тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС) и отнесены ко II группе патогенности. С декабря 2019 г. распространение получил новый короновирус SARS-CoV-2, а 11 марта 2020 г. ВОЗ объявила о начале пандемии COVID-19. SARS-CoV-2 включен в перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих (постановление Правительства Российской Федерации от 31 января 2020 г. № 66). В настоящее время диагностика острой инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2, основана на методе полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. В качестве мишеней обычно используются области генов вируса N, E, S и RdRP.
Хламидия трахоматис
Хламидия трахоматис - облигатная внутриклеточная бактерия, заражающая более 100 миллионов люди каждый год во всем мире половым путем [1]. Большинство людей не знают о ней, потому что она часто проходит бессимптомно, может привести к серьезным неблагоприятным исходам у женщин [2]. На данный момент существует большой выбор диагностических тестов, среди которых выделяются методы диагностики, основанные на ПЦР, благодаря высокой чувствительности и селективности. Однако распространение и появление новых штаммов, мутации в известных обуславливают постоянную актуальность работ по оценки применимости существующих и разработке новых тест-систем. К выбору диагностической метода необходимо взвешенно подходить, так как в случае локальные изменения в распространенности хламидийной инфекции могут быть связаны с непригодностью теста регистрировать определенный штамм возбудителя [6,7]
Подбор праймеров
Правильный выбор последовательности праймеров является ключевым моментом в разработке реактивов. Гибкость в выборе праймеров в первую очередь определяется задачей. В случае определения однонуклеотидной мутации положение праймеров, например, 3'-конца строго задано, в то время как задача определения возбудителя инфекции может допускать выбор гена и даже мишени (геномной или плазмидной ДНК, РНК). Однако, в любом случае, нуклеотидная последовательность праймеров будет определять селективность, чувствительность анализа и робастность тест-системы.