Каждый человек хоть раз в своей жизни задумывался на тем, сделать ли что-либо самому или купить готовое. Собственная разработка тест-систем позволяет получить решение, которое будет соответствовать особенностям решаемых проблем и максимально удобно встраиваться в организацию работы лаборатории. Применение коммерческие наборов реактивов позволяют максимально быстро получить результат и продолжать дальнейшую работу.
При разработке реактивов исследователь нужно пройти три этапа: планирование, экспериментальная часть и выводы. На стадии планирования работ необходимо сформулировать цель и критерии ее достижения, составить список задач и оценить материально-техническую базу. На экспериментальном этапе проводится подбор праймеров и зондов, оптимизация условий реакции и валидация итоговой методики. После окончания экспериментальной части проводится оформление результатов и их оценка по критериям достижения поставленной цели. Детальное наполнение этих этапов зависит от специфики решаемых задач и области работы лаборатории, но каждый из этих этапов в том или ином виде содержит ряд обязательных пунктов, которые будут подробнее рассмотрены далее.
Область применения ПЦР можно разделить на две большие части: качественное и количественное определение [1]. К качественному относится скрининг (анализ ряда образцов на один признак), идентификация (анализ одного образца на несколько признаков). К количественному анализу относится изучение экспрессии генов и определение содержания. Данные категории являются условными и на практике границы качественного и количественного анализа размываются. Вне зависимости от конкретного приложения разработка методики анализа включется в себя выбор мишени анализа, выбор типа ПЦР и детекции, ведение контроля.
Правильный выбор последовательности праймеров является ключевым моментом в разработке реактивов. Гибкость в выборе праймеров в первую очередь определяется задачей. В случае определения однонуклеотидной мутации положение праймеров, например, 3'-конца строго задано, в то время как задача определения возбудителя инфекции может допускать выбор гена и даже мишени (геномной или плазмидной ДНК, РНК). Однако, в любом случае, нуклеотидная последовательность праймеров будет определять селективность, чувствительность анализа и робастность тест-системы.